外泌体提取及鉴定

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常见问题解答

服务项目	实验内容明细	实验周期	客户提供	交付结果
外泌体分离、鉴定与外泌体microRNA提取及QPCR	磁珠法外泌体分离	7个工作日	细胞上清、血清、血浆、脑脊液、卵泡液、尿液等体液	外泌体
	电镜检测		待测样品	6张不同倍数的电镜照片
	NTA粒径检测		待测样品	外泌体粒径报告（NTA检测周一送样，周五出结果）
	Western Blot检测（不提供抗体）		目的抗体、待测样品	WB检测结果
	外泌体microRNA提取及浓度测定	7个工作日	外泌体样品及来源	外泌体microRNA及浓度
	外泌体microRNA反转录		外泌体microRNA	外泌体microRNA及浓度
	引物设计与合成		提供基因属性	剩余引物
	QPCR (SYBR Green I法)		/	原始数据、分析结果、实验报告

外泌体分离、鉴定问题与分析

问题	可能原因	解决方案
纯化的外泌体浓度低	样品中外泌体含量较少。	更换成外泌体含量较高的样品，或浓缩样品。
	样品用量较少。	增加纯化体系中的样品量，或扩大纯化体系。
	样品反复冻融，外泌体破坏。	使用新鲜的样品。
	样品保存条件不当。	样品长期保存应置于-80 ℃。
	样品经过多次滤膜过滤。	减少样品的过滤次数。
	试剂盒过期。	使用保质期内的试剂。
	磁珠冻存，吸附外泌体能力降低，甚至消失。	更换新的磁珠或试剂盒。
	未按规定体积添加磁珠，磁珠用量减少。	按照纯化体系要求，使用正确体积的磁珠。
	未按照纯化体系要求，随意更改纯化体系中各试剂比例。	按照纯化体系要求，按比例添加试剂盒中的各成分到纯化体系中。
	未按照说明书操作。	孵育方式与洗脱强度等实验操作请严格按照说明书进行。
	磁珠与样品孵育时间偏短。	延长孵育时间。
	洗脱强度偏低。	增加Vortex强度，延长Vortex时间。
	洗脱液体积偏大。	减少洗脱液体积。
提取的外泌体蛋白浓度低	纯化的外泌体浓度较低。	参见上述解决方案。
	裂解液裂解能力较弱。	使用裂解能力强的裂解液，或本公司生产的外泌体蛋白提取试剂盒（Ome-04）。
	本试剂盒纯化的外泌体纯度高，几乎不含杂蛋白。	增加外泌体浓度。
提取的外泌体蛋白中杂蛋白增多	样品与磁珠孵育时间过长，导致杂蛋白非特异性吸附。	减少样品与磁珠的孵育时间。
提取的外泌体蛋白中杂蛋白增多	提取外泌体的样品为浓缩后的样品，杂蛋白含量较高。	减少提取外泌体时的样品用量，或使用未浓缩的样品。
提取的外泌体miRNA浓度低	外泌体浓度偏低	参见上述解决方案。
	外泌体用量偏少	增加miRNA提取时每个样品中的外泌体用量，或扩大miRNA提取体系。
	RNA提取试剂盒不适合miRNA提取。	外泌体中RNA多为miRNA，且含量很低，请选择微量RNA提取试剂盒，或选择本公司生产的外泌体miRNA提取试剂盒（Ome-05）。

外泌体microRNA提取常见问题及分析

问题	可能原因	解决方案
microRNA降解	样品反复冻融或保存不当。	尽量使用新鲜的外泌体样品。样品应保存在-80 ℃，避免反复冻融。
	耗材存在RNA酶污染。	选择使用RNase-free的耗材，或将耗材进行RNase清除处理。
	没有在低温环境下操作。	请在冰上或冰水混合物中提取microRNA。
	microRNA洗脱液中含有RNase。	选择使用RNase-free 的洗脱液或ddH₂O。
	保存条件不当。	提取的microRNA尽快保存在-80 ℃，而不是-20 ℃。
microRNA浓度低	外泌体样品用量较少。	增加样品用量，或扩大microRNA提取体系。
	样品中外泌体浓度偏低。	使用浓度较高的外泌体样本。
	磁珠洗脱不充分。	延长震荡时间，增加震荡强度。
	磁珠失效，无法吸附microRNA。	磁珠已过保质期，或被冻存过。
	洗脱液用量较大。	减少洗脱液体积。
microRNA溶液浑浊	溶液中含有磁珠。	microRNA溶液，4 ℃，12, 000 g离心2 min，沉淀磁珠。或转入磁力架，4 ℃静置5 min，聚集磁珠。再转移上清至新的EP管中，即可去除RNA溶液中的磁珠。