外囊泡相关

慢病毒包装、纯化、感染

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服务项目实验内容明细实验周期客户提供交付结果
(干扰)慢病毒包装、纯化及感染干扰定制/三选一套餐25个工作日提供基因属性、标签质粒、慢病毒上清与实验报告
慢病毒包装/
磁珠法慢病毒纯化2个工作日含慢病毒的细胞上清液慢病毒溶液与实验报告
慢病毒滴度检测慢病毒溶液
细胞培养7个工作日细胞株原始数据、分析结果、实验报告
慢病毒感染细胞慢病毒溶液
感染效果检测(WB(不提供抗体)、QPCR)WB检测需提供目的抗体、QP提供基因属性



慢病毒纯化常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

纯化慢病毒滴度低

纯化前的细胞培养上清中的慢病毒滴度较低

更换成慢病毒滴度较高的细胞培养上清,重新纯化,或浓缩样品。

含慢病毒的细胞培养上清用量较少

增加纯化体系中慢病毒上清液用量,或扩大纯化体系。

纯化试剂过期

保证使用保质期内的试剂。

磁珠冻存,吸附慢病毒能力降低甚至消失

更换新的磁珠或试剂盒。

未按规定体积添加磁珠,磁珠用量减少

按照纯化体系要求,正确使用磁珠。

未按照体系要求,随意更改体系中各试剂比例

按照纯化体系要求,按比例添加试剂盒中的各成分到纯化体系中。

磁珠与慢病毒上清液孵育时间偏短

延长孵育时间。

洗脱强度偏低

增加Vortex强度,延长Vortex时间。

慢病毒上清液被微滤膜过滤,慢病毒减少

慢病毒上清液不使用滤膜孔径为0.2和0.45 μm的滤器过滤,以及更小孔径滤膜的滤器过滤。

纯化的慢病毒溶液被微滤膜过滤,慢病毒减少

纯化的慢病毒溶液不使用滤膜孔径为0.2和0.45 μm的滤器过滤,以及更小孔径滤膜的滤器过滤。请使用试剂盒提供的大孔径滤膜过滤。

慢病毒上清液被高速离心,导致慢病毒减少

慢病毒上清液离心条件是:1,000 rpm(100 g),4℃,离心5 min,去除细胞碎片等杂质即可。

纯化的慢病毒感染效率偏低

纯化的慢病毒用量较少

增加纯化的慢病毒用量。

Polybrene效率偏低

使用本公司的慢病毒感染增强试剂盒。

细胞密度偏大

慢病毒感染时,细胞密度控制在70%以下。

细胞状态差

请使用状态较好的对数生长期细胞做慢病毒感染。

纯化的慢病毒反复冻融,导致活性降低

纯化的慢病毒4℃保存,1个月用完。


慢病毒感染常见问题与分析 


问题

可能原因

解决方案

慢病毒感染增强效果不显著

慢病毒感染增强试剂过期

请查阅试剂生产日期,确保试剂在保质期内。

存储不当导致感染增强试剂失效

试剂A与试剂C严禁冻存,否则失效。而试剂B长期保存在-80 ℃。

慢病毒滴度过低

纯化慢病毒,或重新包装慢病毒,提高慢病毒滴度。

慢病毒用量偏少

增加慢病毒用量。

细胞状态不好

请选择对数生长期细胞进行慢病毒感染实验。

细胞密度过大

降低细胞密度。

细胞毒性大

感染增强试剂用量过大

按比例缩减感染增强试剂的用量。

慢病毒感染增强试剂添加不均匀

不要直接将慢病毒感染增强试剂添加到细胞培养液中,应该先与部分细胞培养液混合,再加入细胞培养板中。

细胞密度过低

提高感染时细胞密度。

细胞状态较差

请使用生长状态良好的细胞做慢病毒感染。

细胞株特异性。

对于慢病毒感染增强试剂,悬浮细胞一般比贴壁细胞敏感,原代培养细胞比细胞株敏感。在敏感细胞株中,按比例减少各试剂用量。