问题 | 可能原因 | 解决方案 |
纯化慢病毒滴度低 | 纯化前的细胞培养上清中的慢病毒滴度较低 | 更换成慢病毒滴度较高的细胞培养上清,重新纯化,或浓缩样品。 |
含慢病毒的细胞培养上清用量较少 | 增加纯化体系中慢病毒上清液用量,或扩大纯化体系。 |
纯化试剂过期 | 保证使用保质期内的试剂。 |
磁珠冻存,吸附慢病毒能力降低甚至消失 | 更换新的磁珠或试剂盒。 |
未按规定体积添加磁珠,磁珠用量减少 | 按照纯化体系要求,正确使用磁珠。 |
未按照体系要求,随意更改体系中各试剂比例 | 按照纯化体系要求,按比例添加试剂盒中的各成分到纯化体系中。 |
磁珠与慢病毒上清液孵育时间偏短 | 延长孵育时间。 |
洗脱强度偏低 | 增加Vortex强度,延长Vortex时间。 |
慢病毒上清液被微滤膜过滤,慢病毒减少 | 慢病毒上清液不使用滤膜孔径为0.2和0.45 μm的滤器过滤,以及更小孔径滤膜的滤器过滤。 |
纯化的慢病毒溶液被微滤膜过滤,慢病毒减少 | 纯化的慢病毒溶液不使用滤膜孔径为0.2和0.45 μm的滤器过滤,以及更小孔径滤膜的滤器过滤。请使用试剂盒提供的大孔径滤膜过滤。 |
慢病毒上清液被高速离心,导致慢病毒减少 | 慢病毒上清液离心条件是:1,000 rpm(100 g),4℃,离心5 min,去除细胞碎片等杂质即可。 |
纯化的慢病毒感染效率偏低 | 纯化的慢病毒用量较少 | 增加纯化的慢病毒用量。 |
Polybrene效率偏低 | 使用本公司的慢病毒感染增强试剂盒。 |
细胞密度偏大 | 慢病毒感染时,细胞密度控制在70%以下。 |
细胞状态差 | 请使用状态较好的对数生长期细胞做慢病毒感染。 |
纯化的慢病毒反复冻融,导致活性降低 | 纯化的慢病毒4℃保存,1个月用完。 |