问题 | 可能原因 | 解决方案 |
酶活性值偏低 | 细胞转染效率低,luciferase表达水平偏低。 | 增强细胞转染效率,或更换成转染效率较高的的细胞株,如293T细胞。 |
细胞裂解产物使用量偏少。 | 增加检测体系中的细胞裂解产物。 |
细胞裂解不充分。 | 请用配制的1 × 细胞裂解液裂解细胞30 min,裂解过程中不断震荡。 |
荧光素酶活性检测试剂失效。 | 请按规定使用和保存试剂盒。 |
荧光素酶活性检测试剂反复冻融。 | 请收货后及时分装荧光素酶活性检测试剂,避免反复冻融。 |
重复测量的荧光素酶活性值偏差大 | 样品和检测试剂未平衡到室温。 | 提前取出样品和分装的检测试剂,避光放置几分钟,平衡到室温后再开始检测。 |
样品加样量不准。 | 使用精确度较高的移液器,保证加样量,混合次数及间隔时间一致。 |
检测试剂不是同一批次分装的检测试剂。 | 反复冻融降低检测试剂的灵敏度,因此,检测同一样品时,使用同一批次分装,且没有反复冻融的荧光素酶活性检测试剂。 |
荧光素酶活性值偏高 | 细胞转染效率高,luciferase表达量高。 | 减少细胞裂解产物用量,或用1×细胞裂解液稀释细胞裂解产物后再测定。 |
细胞裂解产物用量偏大。 | 减少测定体系中的细胞裂解产物用量。 |