问题 | 可能原因 | 解决方案 |
RNA降解 | 样品反复冻融或保存不当 | 尽量使用新鲜的组织或细胞样品。样品取出后尽快保存在-80 ℃,避免反复冻融。 |
耗材存在RNA酶污染。 | 选择使用RNase-free的耗材,或将耗材进行RNase清除处理。 |
没有在低温环境下操作。 | 请在冰上或冰水混合物中提取RNA。 |
细胞消化过度。 | 收集细胞时缩短胰酶消化时间。 |
RNA洗脱液含有RNase | 选择使用RNase-free 的洗脱液或ddH2O。 |
保存条件不当。 | 提取的RNA尽快保存在-80 ℃,而不是-20 ℃。 |
RNA浓度低 | 样品量过低。 | 增加样品量。 |
裂解不充分。 | 充分混匀,室温静置5 min,或增加裂解液用量。 |
洗脱液体积偏小。 | 洗脱体积不小于50 μl。 |
洗脱液未滴加到吸附膜上。 | 洗脱液滴加到纯化柱中央的吸附膜上。 |
洗脱液孵育时间偏短。 | 洗脱液加入纯化柱中央后,室温静置5 min,再洗脱。 |
基因组DNA污染 | 样品量过大。 | 按照说明书内样品量要求,减少样品用量。 |