Omifection
(质粒DNA转染试剂)
产品编号 | 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
Omc-01 | Omifection | 1 mL | 4 ℃ 2年 |
说明书 | 1份 |
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一、运输与存储条件
本产品常温运输,4 ℃ 保存、严禁冻存。
二、注意事项(请使用试剂盒前阅读此注意事项)
1. 请利用对数生长期的细胞做质粒DNA转染实验,一般在细胞传代后24-36 h,开始转染质粒DNA,可以提高转染效率。
2. 细胞密度对转染效率也具有很大的影响,请选择汇合度为50-80%的对数生长期细胞进行质粒DNA转染实验,可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。
3. 质粒DNA的质量直接影响转染效率。建议选择高纯度的质粒DNA(OD260/280在1.7~1.9之间)进行细胞转染实验,质粒DNA浓度建议在0.2 μg/ μl以上。
4. 质粒DNA与Omifection混合后孵育时间不宜太短,建议15-30 min(30 min转染效果会更好),以免转染复合体形成减少,降低转染效率。
5. Omifection在大多数细胞系和原代细胞中没有明显的细胞毒性,转染后可以不换培养液,或24 h后再置换培养液。
6. 悬浮细胞转染质粒DNA时,请转染24 h后换液,使转染复合体能够完全被细胞吞噬。
7. 转染12 h后,质粒携带的外源基因(如GFP)开始表达,24 h后表达50-70%,48 h后表达量达到顶峰。更换新鲜的培养液可以刺激外源基因的表达。因此,检测外源基因表达水平时,请在48 h后观察,或收集细胞检测,可以得到较好的实验结果。
8. 本试剂4 ℃保存,严禁冻存。冻存后严重降低试剂的转染效率,甚至导致试剂完全失效。
三、产品简介
Omifection是一款非脂质体类真核细胞DNA转染试剂,主要用于质粒DNA转染,在多种细胞中都具有较高的转染效率和超低的细胞毒性,广泛用于蛋白表达、文库筛选和慢病毒包装等实验。
四、特点与优势
1. 转染效率高。在多种细胞中能够高效介导质粒DNA的转染和外源基因的表达。
2. 细胞毒性低。Omifection对大多数细胞系和原代细胞没有毒性,转染后可以不更换细胞培养液。
3. 操作方便。本产品不受抗生素和血清的影响,转染前细胞不用换液。
五、使用说明
以6孔细胞培养板培养的贴壁细胞作为实验体系,细胞转染实验步骤如下:
1. 细胞培养。胰酶消化法收集细胞,计数后接种到6孔板中,24 h后细胞密度达到50%-80%。
2. 转染复合体制备。移取200 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco)加入灭菌的EP管(1.5 mL)中,再依次加入2 μg质粒(质粒体积依据质粒浓度计算)和6 μL Omifection转染试剂,混合10-20次,室温静置15-30 min (30 min转染效果会更好),形成转染复合体。
3. 细胞转染。将转染复合体加入细胞培养液中,轻摇混匀,转入CO2培养箱中继续培养。
4. 转染12-24 h后换液,48 h检测外源蛋白表达情况(如荧光显微镜下检测GFP荧光)。
表1. DNA、Omifection与OPTI-MEM用量表
培养板 | DNA量 (μg) | Omifection 用量 (μL) | OPTI-MEM用量 (μL) |
24 孔板 | 0.5 | 1.5 | 100 |
6 孔板 | 2 | 6 | 200 |
Φ 35 mm培养皿 | 2 | 6 | 200 |
Φ 60 mm培养皿 | 4 | 12 | 400 |
T25细胞培养瓶 | 5 | 15 | 500 |
六、常见问题与分析
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
转染效率低 | 细胞株本身转染效率较低。 | 提高质粒和Omifection的用量。 |
细胞没有处于对数生长期。 | 细胞传代后24-36 h内转染。 |
细胞密度过高与过低。 | 调整细胞接种数量,转染时后细胞密度达到50-80%。 |
质粒纯度和浓度偏低。 | 请使用去除蛋白污染的质粒,OD260/280在1.7-1.9之间,浓度为0.2 μg/μl以上。 |
质粒用量较少。 | 请参考说明书中的质粒DNA用量,每孔细胞转染的质粒DNA用量不可少于最低用量。 |
目的基因未完全表达。 | 转染24 h后外源基因开始表达,48 h后达到高峰,选取转染后48 h检测目的基因表达,效果较好。 |
转染复合体形成时间偏短。 | 质粒DNA与Omifection剧烈混合后,室温静置30 min,保证转染复合体充分形成,且加入细胞培养液前禁止再混匀,以免破坏转染复合体。 |
质粒DNA与Omifection未按规定比例混合。 | 请按照质粒DNA:Omifection =1μg:3 μl的比例混合, Omifection的用量减少,则转染效率降低。 |
细胞毒性大 | 特定细胞株对Omifection敏感。 | 减少Omifection用量,转染后6 h换液。 |
细胞密度偏低。 | 增加接种细胞密度,转染是细胞密度达到50%以上。 |
质粒纯度较低。 | 使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒,增加质粒纯度。 |
细胞状态较差。 | 提高细胞状态,或更换细胞。 |
Omifection用量较大。 | 请按表格规定用量使用Omifection。 |