Omifection-R（siRNA转染试剂) ￥880.00

Omifection-R

（siRNA转染试剂）

一、运输与存储条件

   本产品常温运输， 4 ℃ 保存，严禁冻存。

二、注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）

1.   请利用对数生长期细胞做siRNA转染实验，一般在细胞传代后24 -36 h，开始转染siRNA，可以保证转染效率。

2.   细胞密度对转染效率也具有很大的影响，请选择汇合度为30-70%的对数生长期细胞进行siRNA转染实验，可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。

3.   siRNA干粉溶解后请分装，并保存在-80 ℃，避免反复冻融而降解。

4.   siRNA与Omifection-R混合后孵育时间不宜太短，建议15-30 min（30 min转染效果会更好），以免转染复合体形成减少，降低转染效率。

5.   表1中提供的Omifection-R用量能够有效进行siRNA的转染，不可超过最大使用剂量，以免出现细胞毒性。

6.   悬浮细胞转染siRNA时，siRNA进入细胞较慢，禁止转染后6 h换液。请转染24 -36 h后换液，使转染复合体能够完全被细胞吞噬。

7.   贴壁细胞转染荧光标记的siRNA（如siRNA-FAM）6 h后，荧光显微镜下可以观察到荧光，12 h时达到高峰，并开始下降，24 -48 h，荧光降低，直至消失。因此，检测靶基因的敲低效率时，可以收集转染后24 h-36 h的细胞样品并检测。

8.   与绿色荧光蛋白（GFP）相比，荧光标记的siRNA（如siRNA-FAM）在荧光显微镜下显示的荧光点较小，亮度较低，提高激发光的强度，可以增强siRNA的荧光强度和检测效率。

9.   本试剂4 ℃保存，严禁冻存。冻存后的Omifection-R转染效率降低，甚至完全消失。

三、产品简介

Omifection-R是一款专门用于siRNA转染的试剂，转染效率高，细胞毒性低，在多种细胞系及原代细胞中都表现出良好的转染效果。

四、特点与优势

1.     转染效率高。本产品与Lipofectamine 2000或RNAi Max等转染试剂的转染效率类似。

2.     细胞毒性低。本产品在多种细胞系和原代细胞的siRNA转染实验中没有表现出细胞毒性。

3.     使用方便。本产品不受血清和抗生素的影响，转染前不用更换细胞培养液。

五、使用说明

1.      以6孔细胞培养板培养的贴壁细胞为实验体系，转染实验流程如下：

2.      细胞培养。胰酶消化法收集细胞并计数，接种到6孔细胞培养板，培养24 h后细胞密度达到30%-70%。（细胞密度太大不利于转染）

3.      siRNA制备。利用RNase-free ddH2O溶解siRNA干粉，终浓度为20 μM，即利用125 μL的RNase-free ddH2O溶解1 OD（33 μg或2.5 nM）siRNA干粉，震荡（Vortex）使其溶解。

4.      转染复合体制备。准备2个无菌EP管，各加入100 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco），其中一管加入4 μL Omifection-R，混合10次，室温静置5 min。另外一管加入6 μL siRNA（20 μM）溶液，混匀。将Omifection-R混合液滴加到siRNA混合液中，混匀，室温静置30 min（15-30 min，但孵育30 min转染效果更好），制备转染复合体。

5.      细胞转染。将转染复合体滴加入细胞培养液中，轻摇混匀，转入CO2培养箱中继续培养。

6.      换液。转染6-12 h，更换成新鲜的细胞培养液。若无明显细胞毒性，也可不用换液。

7.      转染24-36 h，利用QPCR检测目的基因mRNA表达水平，或利用Western blot检测目的蛋白表达水平。

表1. Omifection-R与siRNA用量表

 六、常见问题与分析。