CCK-8
产品编号 | 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
Omc-03-1 ml | CCK-8 | 1 ml | 4 ℃ 2年 |
| 说明书 | 1份 |
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一、运输与存储条件
本产品低温运输，4 ℃密封避光保存，有效期2年。
二、注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）
1. 如果吸光度值偏低，则适当增加细胞数量，并适当延长CCK-8孵育时间。
2. 测定吸光度值前应确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定，吸光度值会异常。
3. 请测定450 nm处吸光度值，若无450 nm滤光片，可以使用420-480 nm的滤光片。
4. 若连续多天测定培养细胞的吸光度值，请保持每次CCK-8孵育时间的一致，避免因孵育时间不同而导致吸光度值偏差。
三、产品简介
Cell Counting Kit-8，简称CCK-8，主要成份是四唑盐WST-8，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成水溶性的formazan，其颜色深浅程度与细胞数量呈正比。因此，CCK-8试剂常用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等实验。
四、特点与优势
1. 本试剂为增强型CCK-8检测试剂，灵敏度高，可以检测到的细胞数量下限为1,000 个/孔。
2. 本试剂经脱氢酶作用产生水溶性的formazan，使培养液变成橙黄色，可以直接测定其OD值。
3. CCK-8细胞毒性低，加入细胞培养液后，可以在孵育后的不同时间点测定OD值，以便寻找最佳孵育时间。
五、使用说明
1. 细胞培养。胰酶消化法收集细胞，计数并重悬细胞，加入96孔板，100 μL/孔，并设置只加细胞培养液，不加细胞的孔，作为空白对照。每个实验组和空白对照组至少设置3个重复孔，以便测得的OD值可以做统计分析。
2. CCK-8孵育。在细胞培养液中加入CCK-8试剂，10 μL/孔，轻轻震荡，混匀，继续培养。
3. 吸光度值检测。CCK-8加入后不同时间点（0.5h，1h，2h），利用酶标仪检测450 nm处吸光度值（OD值），选取最佳OD值做统计分析。
4. 细胞存活率计算：
细胞存活率 (%)=([A(加药)-A(空白)]/A(对照)-A(空白)])×100
A(加药)：药物处理细胞的吸光度值
A(空白)：利用培养液作为空白对照孔的吸光度值。
A(对照)：正常生长细胞的吸光度值
六、常见问题与分析。
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
OD值低 | 细胞数量偏少 | 增加接种细胞数量。 |
CCK-8孵育时间偏短 | 延长CCK-8孵育时间。 |
OD值高 | 细胞数量偏多 | 减少接种细胞数量。 |
CCK-8孵育时间偏长 | 缩短CCK-8孵育时间。 |
组间重复孔的OD值差异偏大 | 接种细胞数量不一致 | 使用排枪接种，或提高细胞接种操作的一致性，尽量保持接种的细胞数量一致。 |
培养细胞出现堆积现象 | 接种后用力拍一拍细胞培养板，使细胞均匀接种，防止细胞堆积。 |
CCK-8添加不均匀 | 将CCK-8添加到培养液中，防止挂在培养板的孔壁上，导致添加不均匀。 |
培养板边缘孔中培养液挥发导致体积不一致。 | 尽量不用培养板边缘的孔做检测。 |
