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产品详情
慢病毒滴度快速检测卡 ¥500.00

货号:OmL-05

 规格:10 T                                                                                   

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010-89266887

 慢病毒滴度快速检测卡


产品编号

试剂名称

规格

保存条件

OmL-05

慢病毒滴度快速检测卡

10

RT

说明书

1

一、运输和存储条件。

本产品常温运输,室温避光保存。

二、注意事项(请使用试剂盒前阅读此注意事项)

1.    室温避光保存,保持干燥。

2.    建议使用含有慢病毒的细胞培养上清直接检测慢病毒滴度,若测量值超过最高滴度,请用PBS稀释(100倍或50倍稀释)后再检测,测量值乘以稀释倍数即为细胞培养上清中的慢病毒滴度。

3.    为了您的健康,请穿实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜,使用生物安全柜。

三、产品简介。

本产品是以胶体金免疫层析技术为基础,通过快速检测慢病毒和假病毒外壳上的P24蛋白来确定病毒滴度的检测卡。本检测卡由样品窗(S)、质控线(C)和检测线(T)三部分组成。待测样品滴加到样品窗(S)中后,样品中的P24蛋白首先与胶垫上的胶体金标记的P24鼠单克隆抗体结合形成复合体,通过毛细电泳作用泳向检测线和质控线,到达检测线,被检测线上的另外一种P24鼠单克隆抗体识别并捕获。随着被捕获的复合体的堆积,检测线呈现出酒红色。当复合体继续向前泳动到质控线时,P24鼠单克隆抗体被质控线上的胶体金标记的羊抗鼠多克隆抗体捕获,质控线呈现出酒红色。通过判读检测线和质控线是否显色,即可判断样品中是否存在 P24蛋白。P24蛋白浓度与检测线颜色的深浅呈正相关,通过与比色卡(图1)对比,即可定量检出样品中的P24蛋白浓度,进而大致估算出慢病毒滴度。

四、检测卡用途:

1.    评估基于HIV-1的慢病毒或假病毒包装效率。

2.    估算基于HIV-1的慢病毒或假病毒滴度。

五、特点与优势。

1.   本产品操作简便,可快速检测慢病毒或假病毒的滴度。

2.   使用少量样品即可初步评估慢病毒包装效率。

六、使用说明

1.    打开包装,取出检测卡,平放在生物安全柜中。

2.    用移液器吸取80 μl含有慢病毒的细胞培养上清或纯化慢病毒溶液,加入样品窗S中。

3.    室温静置10-15 min,判读结果。(15 min读取效果最佳,20 min内完成结果判读。)

4.    结果判读:

1)    质控线(C)不显色,无论检测线(T)是否显色,检测结果均无效。

2)    质控线(C)和检测线(T)均显色,为阳性,即样品中含有慢病毒或假病毒。

3)    质控线(C)显色,检测线(T)显色达到最深条带,用PBS适当稀释(100倍或50倍稀释),重新检测。

4)    质控线(C)显色,检测线(T)不显色,检测结果为阴性,即不含慢病毒。

5)    慢病毒滴度评估。比对检测卡中检测线的颜色与图1中色谱条带颜色深浅,根据表1中所列出的P24蛋白浓度与慢病毒滴度之间的关系,大致估算出样品中的慢病毒滴度。



表1. P24蛋白浓度与慢病毒滴度关联表

条带编号

T1

T2

T3

T4

T5

P24蛋白浓度

1000 ng/ml

500 ng/ml

100 ng/ml

50 ng/ml

10 ng/ml

LPs/ml

1.25×1010

6.25×109

1.25×109

6.25×108

1.25×108

TU/ml

1.25×107-8

6.25×106-7

1.25×106-7

6.25×105-6

1.25×105-6

七、慢病毒滴度估算原理:

1.        一个慢病毒颗粒(Lentiviral Particle, LP)中约有2000个P24蛋白分子,用以下公式可以计算慢病毒的颗粒数(LP)。

2.        一个LP相当于:2000×24×103/(6×1023) g of P24 = 8×10-5 pg P24;或者说1 ng P24=1.25×107 LPs(≈1.25×104-5 TU)。

3.        正常情况下,每100-1000 LPs中会有1个具有感染活性的病毒载体,即1 TU(Transducing Unit)。

4.        上述公式计算得到的 LP 值是理论值,检测样品中游离的 P24 蛋白可能会使该值偏高。

5.        本产品是半定量检测卡,数据仅供参考。


八、常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

检测线及质控线颜色浅

样品中有干扰物质

PBS稀释后重新检测

检测线颜色深

样品中慢病毒滴度高

PBS稀释样品后重新检测

背景较深

培养基有背景颜色,pH偏高等

PBS稀释后重新检测

质控线没有显色

检测卡失效

使用新的检测卡



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