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产品详情
微量样品外泌体纯化试剂盒(磁珠型) ¥2980.00

货号:Ome-03

 规格:20 Tests 

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010-89266887

微量样品外泌体纯化试剂盒

(磁珠型)

产品编号

试剂名称

规格

保存条件

Ome-03

Buffer EXP

5 mL

4 ℃

Buffer EXN

2 ml

4 ℃

Buffer EXE

30 ml

4 ℃

Buffer EXT

1 ml

4 ℃

Magnetic Beads(磁珠)

2 ml

4 ℃

针式过滤器C

20

RT

说明书

1

、运输与存储条件

   本产品常温运输,4 ℃保存,有效期2 年。

二、注意事项请使用试剂盒前阅读此注意事项

1.       磁珠4℃存放,严禁冻存,否则失效。

2.       实验过程中所用的PBSddH2O都必须使用滤膜孔径为0.2 μm的滤器过滤,避免液体中的杂质颗粒导致的外泌体纯度降低。

3.       本试剂盒适用于血清、血浆及其他小体积生物样品中的外泌体纯化。

4.       磁珠长期静置存放会沉到管底,吸取磁珠请前先充分混匀(Vortex)。

5.       建议用新鲜提取的外泌体进行NTA检测。

6.       外泌体过滤时建议先用PBS润洗针式过滤器,以减少外泌体溶液的损失。

7.       纯化后的外泌体可保存在-80 ℃冰箱中,避免反复冻融导致的外泌体破裂。

8.       本试剂盒提供的外泌体纯化体系为1 ml/样品,可以纯化0.69 ml血清、血浆或其他生物样品。

9.       若样品较少,可以用ddH2O补齐样品到0.69 ml。

10.   为了您的健康,实验过程中请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜

三、产品简介

本产品是一款以磁珠为分离材料的外泌体纯化试剂盒。在特定的缓冲体系中,磁珠可吸附外泌体,并被洗脱液(PBS或ddH2O)洗脱下来,从而完成外泌体的分离与纯化。同时,利用PBS或ddH2O洗脱后的外泌体不含其它化合物,可直接用于细胞培养实验和动物体内注射。

四、特点与优势

1.     本试剂纯化效率高,外泌体纯化回收率高。

2.     本试剂盒纯化的外泌体纯度高,外源杂蛋白含量低。

3.     本试剂盒操作简单,能够快速(2 h)完成外泌体纯化。

4.     本试剂盒操作温和,纯化时间短,纯化的外泌体完整性好。

5.     本试剂盒纯化的外泌体不含其它化合物,可直接用于细胞培养实验和动物体内注射实验。

五、使用说明

1.    本产品可用于血清、血浆或其他微量样品中外泌体的纯化。

2.    样品准备。样品转入离心管,3000 g,4 ℃离心5 min,弃沉淀,上清转移至新的离心管中,用于外泌体纯化。

3.    磁珠准备。取出试剂盒中的瓶装磁珠,震荡混匀(Vortex)30 sec,利用移液器吸取0.1 ml磁珠,加入1 ml离心管中,3000 g,4 ℃离心2 min,弃上清。

4.    磁珠洗涤。加入1 ml,4 ℃预冷的PBS,震荡混匀(Vortex)30 sec,3000 g,4 ℃离心5 min,弃上清。

5.    外泌体纯化体系。外泌体纯化体系为1 ml,可以纯化0.69 ml的样品,各组份如下表。

                                                   1. 外泌体纯化体系表

试剂名称

试剂体积(μl

试剂比例

Buffer EXP

150

15 %

Buffer EXN

50

5 %

Buffer EXT

10

1 %

Magnetic Bead(磁珠)

100

10%

样品

690

69 %

合计

1000

100 %



6.       外泌体纯化体系配制。根据外泌体纯化体系表,配制外泌体纯化体系,若样品体积不足690 μl,可以用ddH2O补齐体积。

7.       孵育。外泌体纯化体系配制完成后,置于旋转混合器中,4 ℃旋转混合60 min。

8.       磁珠收集。孵育完毕将离心管转入离心机,3000 g,4 ℃离心5 min,沉淀磁珠,弃上清;或将离心管置于磁力架上,4 ℃静置5-10 min,使磁珠聚集,弃上清。

9.       残余液体去除。将装有磁珠沉淀的离心管转入离心机,3000 g,4 ℃离心1 min,用移液器吸尽管中残余液体。

10.   外泌体洗脱。加入0.2-0.5 ml Buffer EXE(PBS或ddH2O),剧烈振荡(Vortex)30 sec。

11.   外泌体收集。7000 g,4 ℃离心2 min,将离心管置于磁力架上(可以有效聚集磁珠,防止磁珠散落在溶液中,降低外泌体纯度),转移上清至新的EP管中,即为纯化的外泌体溶液。

12.   过滤。利用PBS润洗针式过滤器C(即用滤器过滤5 ml PBS),并利用针式过滤器C过滤外泌体溶液,除去杂质,得到高纯度的外泌体溶液。

13.   纯化的外泌体溶液可立即用于粒径检测(NTA分析),或保存在-80 ℃。


六、常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

纯化的外泌体浓度低

样品用量较少。

增加纯化体系中的样品量,或扩大纯化体系。

样品反复冻融,外泌体破坏。

使用新鲜的样品。

试剂盒过期。

使用保质期内的试剂。

磁珠冻存,吸附外泌体能力降低,甚至消失。

更换新的磁珠或试剂盒。

未按规定体积添加磁珠,磁珠用量减少。

按照纯化体系要求,使用正确体积的磁珠。

未按照纯化体系要求,随意更改纯化体系中各试剂比例。

按照纯化体系要求,按比例添加试剂盒中的各成分到纯化体系中。

未按照说明书操作。

孵育方式与洗脱强度等实验操作请严格按照说明书进行。

磁珠与样品孵育时间偏短。

延长孵育时间。

洗脱强度偏低。

增加Vortex强度,延长Vortex时间。

洗脱液体积偏大

减少洗脱液用量。

提取的外泌体蛋白浓度低

纯化的外泌体浓度较低。

参见上述解决方案。

外泌体蛋白提取试剂的裂解能力较弱。

使用裂解能力强的蛋白提取试剂,或本公司生产的外泌体蛋白提取试剂盒(Ome-04)。

本试剂盒纯化的外泌体纯度高,几乎不含杂蛋白。

增加外泌体浓度。

提取的外泌体蛋白中杂蛋白增多

样品与磁珠孵育时间过长,导致杂蛋白非特异性吸附。

减少样品与磁珠的孵育时间。

提取的外泌体miRNA浓度低

外泌体浓度偏低

参见上述解决方案。

外泌体用量偏少

增加miRNA提取时每个样品中的外泌体用量,或扩大miRNA提取体系。

RNA提取试剂盒不适合miRNA提取。

外泌体中RNA多为miRNA,且含量很低,请选择微量RNA提取试剂盒,或选择本公司生产的外泌体miRNA提取试剂盒(Ome-05)。

 


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