血清外泌体纯化试剂盒

（磁珠型）

一、运输与存储条件。

   本产品常温运输，4 ℃保存，有效期2 年。

二、注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）。

1.       磁珠4℃存放，严禁冻存，否则失效。

2.       实验过程中所用的PBS和ddH₂O都必须使用滤膜孔径为0.2 μm的滤器过滤，避免液体中的杂质颗粒导致的外泌体纯度降低。

3.       本试剂盒适用于提取血清、血浆、粘性较大或外泌体含量丰富的样品中的外泌体。

4.       磁珠长期静置存放会沉到管底，吸取磁珠请前先充分混匀（Vortex）。

5.       建议用新鲜提取的外泌体进行NTA检测。

6.       外泌体过滤时建议先用PBS润洗针式过滤器，以减少外泌体溶液的损失。

7.       纯化后的外泌体可保存在-80 ℃冰箱中，避免反复冻融导致的外泌体破裂。

8.       本试剂盒提供的外泌体纯化体系为6 ml/样品，能够纯化4.14 ml血清、血浆或其他生物样本，可以满足外泌体蛋白提取，RNA提取及miRNA提取等多种实验需求。

9.       若样本较少，可以用ddH₂O补齐样品到4.14 ml。也可按照比例减少各试剂用量（请勿随意更改各试剂比例，易导致外泌体纯化失败），构建小体系血清外泌体纯化系统。

10.   为了您的健康，实验过程中请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜。

三、产品简介。

本产品是一款以磁珠为分离材料的外泌体纯化试剂盒。在特定的缓冲体系中，磁珠可吸附外泌体，并被洗脱液（PBS或ddH₂O）洗脱下来，从而完成外泌体的分离与纯化。同时，利用PBS或ddH₂O洗脱后的外泌体不含其它化合物，可直接用于细胞培养实验和动物体内注射。

四、特点与优势。

1.     本试剂纯化效率高，外泌体纯化回收率高。

2.     本试剂盒纯化的外泌体纯度高，外源杂蛋白含量低。

3.     本试剂盒操作简单，能够快速（2 h）完成外泌体纯化。

4.     本试剂盒操作温和，纯化时间短，纯化的外泌体完整性好。

5.     本试剂盒纯化的外泌体不含其它化合物，可直接用于细胞培养实验和动物体内注射实验。

五、使用说明。

1.    本产品主要用于血清、血浆及其他外泌体含量丰富的样品中的外泌体纯化。

2.    样品准备。血清等样品转入离心管，3000 g，4 ℃离心5 min，弃沉淀，上清转移至新的离心管中，用于外泌体纯化。

3.    磁珠准备。取出试剂盒中的瓶装磁珠，震荡混匀（Vortex）30 sec，利用移液器吸取0.6 ml磁珠，加入15 ml离心管中，3000 g，4 ℃离心2 min，弃上清。

4.    磁珠洗涤。加入10 ml，4 ℃预冷的PBS，震荡混匀（Vortex）30 sec，3000 g，4 ℃离心5 min，弃上清。

5.    外泌体纯化体系。外泌体纯化体系为6 ml，可以纯化4 ml左右的血清样本，各组份如下表。

                表1. 外泌体纯化体系表

6.       外泌体纯化体系配制。根据外泌体纯化体系表，配制外泌体纯化体系，若样品体积不足4.14 ml，可以用ddH₂O补齐体积。也可以按照比例减少各试剂的用量（请勿随意更改各试剂比例，易导致外泌体纯化失败），构建小体系外泌体纯化系统。

7.       孵育。外泌体纯化体系配制完成后，置于旋转混合器中，4 ℃旋转混合60 min。

8.       磁珠收集。孵育完毕将离心管转入离心机，3000 g，4 ℃离心5 min，沉淀磁珠，弃上清；或将离心管置于磁力架上，4 ℃静置5-10 min，使磁珠聚集，弃上清。

9.       残余液体去除。将装有磁珠沉淀的离心管转入离心机，3000 g，4 ℃离心1 min，用移液器吸尽管中残余液体。

10.   外泌体洗脱。加入0.8-1.5 ml Buffer EXE（PBS或ddH₂O），剧烈振荡（Vortex）30 sec。

11.   外泌体收集。7000 g，4 ℃离心2 min，将离心管置于磁力架上（可以有效聚集磁珠，防止磁珠散落在溶液中，降低外泌体纯度），转移上清至新的EP管中，即为纯化的外泌体溶液。

12.   过滤。利用PBS润洗针式过滤器A和B（即用这两种滤器过滤5 ml PBS），并利用针式过滤器A过滤外泌体溶液，除去体积较大杂质。滤液再用针式过滤器B过滤，除去体积较小的杂质，得到高纯度的外泌体溶液。

13.   纯化的外泌体溶液可立即用于粒径检测（NTA分析），或保存在-80 ℃。

六、常见问题与分析。