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产品详情
外泌体纯化试剂盒(磁珠型) ¥4731.00

货号: Ome-01

 规格: 10 Tests                                                                                                     

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010-89266887

外泌体纯化试剂盒

(磁珠型)

产品编号

试剂名称

规格

保存条件

Ome-01

Buffer EXP

35 mL

4 ℃

Buffer EXN

15 ml

4 ℃

Buffer EXE

50 ml

4 ℃

Buffer EXT

3 ml

4 ℃

Magnetic Beads(磁珠)

2 ml

4 ℃

针式过滤器A

10

RT

针式过滤器B

10

RT

说明书

1


 

、运输与存储条件

   本产品常温运输,4 ℃保存,有效期2 年

二、注意事项请使用试剂盒前阅读此注意事项

1.    磁珠4℃存放,严禁冻存,否则失效。

2.    实验过程中所用的PBSddH2O都必须使用滤膜孔径为0.2 μm的滤器过滤,避免液体中的杂质颗粒导致的外泌体纯度降低。

3.    本试剂盒适用于细胞培养上清、尿液及其他液体样品中的外泌体纯化。

4.   本试剂盒不适合提取高度浓缩的细胞培养上清中的外泌体。因为细胞培养上清高度浓缩后,杂蛋白和杂质含量显著升高,能够与磁珠发生非特异性吸附,降低外泌体纯度。

5.   磁珠长期静置存放会沉到管底,吸取磁珠前请先充分混匀(Vortex)。

6.   建议用新鲜提取的外泌体进行NTA检测。

7.   外泌体过滤时建议先用PBS润洗针式过滤器,以减少外泌体溶液的损失。

8.   纯化后的外泌体可保存在-80 ℃冰箱中,避免反复冻融导致的外泌体破裂。

9.  本试剂盒提供的外泌体纯化体系为20 ml/样品,若样品较少,可以用无菌的ddH2O补齐体积。也可以按照比例减少试剂盒中各试剂的用量(请勿随意更改各试剂比例,易导致外泌体纯化失败),构建小体系外泌体纯化系统,但每个样品中磁珠用量不得少于0.2ml,否则降低外泌体纯化效果。

10.   为了您的健康,实验过程中请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜

三、产品简介

本产品是一款以磁珠为分离材料的外泌体纯化试剂盒。在特定的缓冲体系中,磁珠可吸附外泌体,并被洗脱液(PBSddH2O)洗脱下来,从而完成外泌体的分离与纯化。同时,利用PBSddH2O洗脱后的外泌体不含其它化合物,可直接用于细胞培养实验和动物体内注射。

四、特点与优势

1.  本试剂纯化效率高,外泌体纯化回收率高

2.  本试剂盒纯化的外泌体纯度高,外源杂蛋白含量低

3.  本试剂盒操作简单,能够快速(2 h)完成外泌体纯化。

4.  本试剂盒操作温和,纯化的外泌体完整性好。

5.  本试剂盒纯化的外泌体不含其它化合物,可直接用于细胞培养实验和动物体内注射实验。

五、使用说明

1.  本产品主要用于细胞培养上清等体积较大的液体样品中外泌体的分离纯化。

2.  样品准备。细胞培养上清转入离心管,3000 g4 ℃离心5 min,弃沉淀,上清转移至新的离心管中,用于外泌体纯化。

3.   磁珠准备。取出试剂盒中的瓶装磁珠,震荡混匀(Vortex30 sec,利用移液器吸取0.2 ml磁珠,加入50 ml离心管中,3000 g4 ℃  离心2        min,弃上清。

4.   磁珠洗涤。加入10 ml4 ℃预冷的PBS,震荡混匀(Vortex30 sec3000 g4 ℃离心5 min,弃上清。

5.   外泌体纯化体系。本产品提供的外泌体纯化体系是20 ml,各组份如下表。

                                                                         1. 外泌体纯化体系表

试剂名称

试剂体积(ml

试剂比例

Buffer EXP

3

15 %

Buffer EXN

1

5 %

Buffer EXT

0.2

1 %

Magnetic Bead(磁珠)

0.2

1 %

样品

15.6

78 %

合计

20

100 %

 

6.  外泌体纯化体系配制。根据外泌体纯化体系表,配制外泌体纯化体系,若样品体积不足15.6 ml时,可以用ddH2O补齐体积。也可以按照比例减少试剂盒中各试剂的用量(请勿随意更改各试剂比例,易导致外泌体纯化失败),构建小体系外泌体纯化系统,但每个样品中磁珠用量不得少于0.2 ml,否则降低外泌体纯化效果。

7.   孵育。外泌体纯化体系配制完成后,置于旋转混合器中,4 ℃旋转混合60 min

8.   磁珠收集。孵育完毕将离心管转入离心机,3000 g4 ℃离心5 min,沉淀磁珠,弃上清;或将离心管置于磁力架上,4 ℃静置5-10 min,使磁珠聚集,弃上清。

9.   残余液体去除。将装有磁珠沉淀的离心管转入离心机,3000 g4 ℃离心1 min,,用移液器吸尽管中残余液体。

10.   外泌体洗脱。加入0.3-1.0 ml Buffer EXEPBSddH2O,洗脱液体积较大时,得到的外泌体浓度较低,反之,则高),剧烈振荡(Vortex30 sec

11.   外泌体收集。7000 g4 ℃离心2 min,将离心管置于磁力架上(可以有效聚集磁珠,防止磁珠散落在溶液中,降低外泌体纯度),转移上清至新的EP管中,即为纯化的外泌体溶液。

12.   过滤。利用PBS润洗针式过滤器AB(即用这两种滤器过滤5 ml PBS),并利用针式过滤器A过滤外泌体溶液,除去体积较大杂质。滤液再用针式过滤器B过滤,除去体积较小的杂质,得到高纯度的外泌体溶液。

13.   纯化的外泌体溶液可立即用于粒径检测(NTA分析),或保存在-80 ℃

七、常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

纯化的外泌体浓度低

样品中外泌体含量较少。

更换成外泌体含量较高的样品,或浓缩样品。

样品用量较少。

增加纯化体系中的样品量,或扩大纯化体系。

样品反复冻融,外泌体破坏。

使用新鲜的样品。

样品保存条件不当。

样品长期保存应置于-80 ℃

样品经过多次滤膜过滤。

减少样品的过滤次数。

试剂盒过期。

使用保质期内的试剂。

磁珠冻存,吸附外泌体能力降低,甚至消失。

更换新的磁珠或试剂盒。

未按规定体积添加磁珠,磁珠用量减少。

按照纯化体系要求,使用正确体积的磁珠。

未按照纯化体系要求,随意更改纯化体系中各试剂比例。

按照纯化体系要求,按比例添加试剂盒中的各成分到纯化体系中。

未按照说明书操作。

孵育方式与洗脱强度等实验操作请严格按照说明书进行。

磁珠与样品孵育时间偏短。

延长孵育时间。

洗脱强度偏低。

增加Vortex强度,延长Vortex时间。

洗脱液体积偏大。

减少洗脱液体积。

提取的外泌体蛋白浓度低

纯化的外泌体浓度较低。

参见上述解决方案。

裂解液裂解能力较弱。

使用裂解能力强的裂解液,或本公司生产的外泌体蛋白提取试剂盒(Ome-04)。

本试剂盒纯化的外泌体纯度高,几乎不含杂蛋白。

增加外泌体浓度。

提取的外泌体蛋白中杂蛋白增多

样品与磁珠孵育时间过长,导致杂蛋白非特异性吸附。

减少样品与磁珠的孵育时间。

提取外泌体的样品为浓缩后的样品,杂蛋白含量较高。

减少提取外泌体时的样品用量,或使用未浓缩的样品。

提取的外泌体miRNA浓度低

外泌体浓度偏低

参见上述解决方案。

外泌体用量偏少

增加miRNA提取时每个样品中的外泌体用量,或扩大miRNA提取体系。

RNA提取试剂盒不适合miRNA提取。

外泌体中RNA多为miRNA,且含量很低,请选择微量RNA提取试剂盒,或选择本公司生产的外泌体miRNA提取试剂盒(Ome-05)。

 


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