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产品详情
CCK-8 ¥94.00

货号:Omc-03-1 ml

规格:1ml 

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CCK-8

 

产品编号

试剂名称

规格

保存条件

Omc-03-1 ml

CCK-8

1 ml

4 ℃  2


说明书

1


 

一、运输与存储条件

本产品低温运输,4 ℃密封避光保存,有效期2年。

二、注意事项请使用试剂盒前阅读此注意事项

1.  如果吸光度值偏低,则适当增加细胞数量,并适当延长CCK-8孵育时间。

2.   测定吸光度值前应确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定,吸光度值会异常。

3.   请测定450 nm处吸光度值,若无450 nm滤光片,可以使用420-480 nm的滤光片。

4.   若连续多天测定培养细胞的吸光度值,请保持每次CCK-8孵育时间的一致,避免因孵育时间不同而导致吸光度值偏差。

三、产品简介

Cell Counting Kit-8,简称CCK-8,主要成份是四唑盐WST-8,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成水溶性的formazan,其颜色深浅程度与细胞数量呈正比。因此,CCK-8试剂常用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等实验。

四、特点与优势

1.  本试剂为增强型CCK-8检测试剂,灵敏度高,可以检测到的细胞数量下限为1,000 /孔。

2. 本试剂经脱氢酶作用产生水溶性的formazan,使培养液变成橙黄色,可以直接测定其OD值。

3.  CCK-8细胞毒性低,加入细胞培养液后,可以在孵育后的不同时间点测定OD值,以便寻找最佳孵育时间。

五、使用说明

1.    细胞培养。胰酶消化法收集细胞,计数并重悬细胞,加入96孔板,100 μL/孔,并设置只加细胞培养液,不加细胞的孔,作为空白对照。每个实验组和空白对照组至少设置3个重复孔,以便测得的OD值可以做统计分析。

2.    CCK-8孵育。在细胞培养液中加入CCK-8试剂,10 μL/孔,轻轻震荡,混匀,继续培养。

3.    吸光度值检测。CCK-8加入后不同时间点(0.5h1h2h),利用酶标仪检测450 nm处吸光度值(OD值),选取最佳OD值做统计分析。

4.    细胞存活率计算:

细胞存活率 (%)=([A(加药)-A(空白)]/A(对照)-A(空白)])×100

A(加药):药物处理细胞的吸光度值

A(空白):利用培养液作为空白对照孔的吸光度值。

A(对照):正常生长细胞的吸光度值

常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

OD值低

细胞数量偏少

增加接种细胞数量。

CCK-8孵育时间偏短

延长CCK-8孵育时间。

OD值高

细胞数量偏多

减少接种细胞数量。

CCK-8孵育时间偏长

缩短CCK-8孵育时间。

组间重复孔的OD值差异偏大

接种细胞数量不一致

使用排枪接种,或提高细胞接种操作的一致性,尽量保持接种的细胞数量一致。

培养细胞出现堆积现象

接种后用力拍一拍细胞培养板,使细胞均匀接种,防止细胞堆积。

CCK-8添加不均匀

CCK-8添加到培养液中,防止挂在培养板的孔壁上,导致添加不均匀。

培养板边缘孔中培养液挥发导致体积不一致。

尽量不用培养板边缘的孔做检测。

 



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