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Omifection-R(siRNA转染试剂) ¥931.00

货号:Omc-02

规格:1mL

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Omifection-R

siRNA转染试剂)

 

产品编号

试剂名称

规格

保存条件

Omc-02

Omifection-R

1 mL

4℃  2

 说明书

1


 

一、运输与存储条件

   本产品常温运输, 4 ℃ 保存,严禁冻存。

二、注意事项请使用试剂盒前阅读此注意事项

1.   请利用对数生长期细胞做siRNA转染实验,一般在细胞传代后24 -36 h,开始转染siRNA,可以保证转染效率。

2.   细胞密度对转染效率也具有很大的影响,请选择汇合度为30-70%的对数生长期细胞进行siRNA转染实验,可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。

3.   siRNA干粉溶解后请分装,并保存在-80 ℃,避免反复冻融而降解。

4.   siRNAOmifection-R混合后孵育时间不宜太短,建议15-30 min30 min转染效果会更好),以免转染复合体形成减少,降低转染效率。

5.   1中提供的Omifection-R用量能够有效进行siRNA的转染,不可超过最大使用剂量,以免出现细胞毒性。

6.   悬浮细胞转染siRNA时,siRNA进入细胞较慢,禁止转染后6 h换液。请转染24 -36 h后换液,使转染复合体能够完全被细胞吞噬。

7.   贴壁细胞转染荧光标记的siRNA(如siRNA-FAM6 h后,荧光显微镜下可以观察到荧光,12 h时达到高峰,并开始下降,24 -48 h,荧光降低,直至消失。因此,检测靶基因的敲低效率时,可以收集转染后24 h-36 h的细胞样品并检测。

8.   与绿色荧光蛋白(GFP)相比,荧光标记的siRNA(如siRNA-FAM)在荧光显微镜下显示的荧光点较小,亮度较低,提高激发光的强度,可以增强siRNA的荧光强度和检测效率。

9.   本试剂4 ℃保存,严禁冻存。冻存后的Omifection-R转染效率降低,甚至完全消失。

三、产品简介

Omifection-R是一款专门用于siRNA转染的试剂,转染效率高,细胞毒性低,在多种细胞系及原代细胞中都表现出良好的转染效果。

四、特点与优势

1.     转染效率高。本产品与Lipofectamine 2000RNAi Max等转染试剂的转染效率类似。

2.     细胞毒性低。本产品在多种细胞系和原代细胞的siRNA转染实验中没有表现出细胞毒性。

3.     使用方便。本产品不受血清和抗生素的影响,转染前不用更换细胞培养液。

五、使用说明

1.      6孔细胞培养板培养的贴壁细胞为实验体系,转染实验流程如下:

2.      细胞培养。胰酶消化法收集细胞并计数,接种到6孔细胞培养板,培养24 h后细胞密度达到30%-70%(细胞密度太大不利于转染)

3.      siRNA制备。利用RNase-free ddH2O溶解siRNA干粉,终浓度为20 μM,即利用125 μLRNase-free ddH2O溶解1 OD33 μg2.5 nMsiRNA干粉,震荡(Vortex)使其溶解。

4.      转染复合体制备。准备2个无菌EP管,各加入100 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco),其中一管加入4 μL Omifection-R,混合10次,室温静置5 min。另外一管加入6 μL siRNA20 μM)溶液,混匀。将Omifection-R混合液滴加到siRNA混合液中,混匀,室温静置30 min15-30 min,但孵育30 min转染效果更好),制备转染复合体。

5.      细胞转染。将转染复合体滴加入细胞培养液中,轻摇混匀,转入CO2培养箱中继续培养。

6.      换液。转染6-12 h,更换成新鲜的细胞培养液。若无明显细胞毒性,也可不用换液。

7.      转染24-36 h,利用QPCR检测目的基因mRNA表达水平,或利用Western blot检测目的蛋白表达水平。

1. Omifection-RsiRNA用量表

培养器皿

20 μM siRNAμL

Omifection-R   (μL)

OPTI-MEM   ( μL)

24 孔板

1-3

0.5-1

50-100

6 孔板

4-10

2-4

100-200

Φ 35 mm培养皿

4-10

2-4

100-200

Φ 60 mm培养皿

8-20

4-8

200-400

 六常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

目的基因敲低效率低

siRNA效率较低。

重新设计并合成新的目的基因的siRNA,或选择已经鉴定的高效siRNA

siRNA用量较少。

提高siRNA用量,其浓度在100 nM以内,都可以作为有效敲低剂量,不算脱靶效应。

Omifection-R用量较少

提高Omifection-R的用量。

siRNAOmifection-R的比例不合适。

请按照omifection-RsiRNA (20 μM)=1:1的体积比混合,或在此基础上提高siRNA的用量。

细胞密度不合适。

调整细胞密度,接种后24 h,细胞密度在30-70%之间,不可过低或过高。

检测目的基因表达水平的时间点不合适。

一般转染24-36 h,收集细胞,检测目的基因的mRNA表达水平,而转染36-48   h,检测目的蛋白的表达水平。

转染复合体形成时间偏短。

siRNAOmifection-R剧烈混合后,室温静置30 min,保证转染复合体充分形成,且加入细胞培养液前禁止再混匀,以免破坏转染复合体。

siRNA降解。

选用RNase-freeEP管和枪尖,避免RNA酶污染,防止siRNA降解。同时,溶解siRNA后分装,保存在-80℃,用时取分装试剂,避免siRNA反复冻融而降解。

细胞毒性大

特定细胞株对Omifection-R敏感。

减少Omifection用量,转染后6 h换液。

细胞密度偏低。

增加接种细胞密度,达到50%以上。

siRNA纯度较低。

选用高纯度的siRNA,如PAGE纯化的siRNA

细胞状态较差。

提高细胞状态,或更换细胞。

Omifection-R用量较大。

请按照表格中的规定用量使用Omifection-R,不要超过最大用量。

 

 

 


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