微信扫码

  • 010-89266887
产品详情
Omifection(质粒DNA转染试剂) ¥836.00

货号:Omc-01

规格:1 mL

全国热线

010-89266887

Omifection 

(质粒DNA转染试剂)

 

产品编号

试剂名称

规格

保存条件

Omc-01

Omifection

1 mL

4 ℃  2

 说明书

1


 

一、运输与存储条件

   本产品常温运输,4 ℃ 保存、严禁冻存。

二、注意事项请使用试剂盒前阅读此注意事项

1.   请利用对数生长期的细胞做质粒DNA转染实验,一般在细胞传代后24-36 h,开始转染质粒DNA,可以提高转染效率。

2.   细胞密度对转染效率也具有很大的影响,请选择汇合度为50-80%的对数生长期细胞进行质粒DNA转染实验,可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。

3.   质粒DNA的质量直接影响转染效率。建议选择高纯度的质粒DNAOD260/2801.7~1.9之间)进行细胞转染实验,质粒DNA浓度建议在0.2 μg/ μl以上。

4.   质粒DNAOmifection混合后孵育时间不宜太短,建议15-30 min30 min转染效果会更好),以免转染复合体形成减少,降低转染效率。

5.   Omifection在大多数细胞系和原代细胞中没有明显的细胞毒性,转染后可以不换培养液,或24 h后再置换培养液。

6.   悬浮细胞转染质粒DNA时,请转染24 h后换液,使转染复合体能够完全被细胞吞噬。

7.   转染12 h后,质粒携带的外源基因(如GFP)开始表达,24 h后表达50-70%48 h后表达量达到顶峰。更换新鲜的培养液可以刺激外源基因的表达。因此,检测外源基因表达水平时,请在48 h后观察,或收集细胞检测,可以得到较好的实验结果。

8.   本试剂4 ℃保存,严禁冻存。冻存后严重降低试剂的转染效率,甚至导致试剂完全失效。

三、产品简介

Omifection是一款非脂质体类真核细胞DNA转染试剂,主要用于质粒DNA转染,在多种细胞中都具有较高的转染效率和超低的细胞毒性,广泛用于蛋白表达、文库筛选和慢病毒包装等实验。

四、特点与优势

1.   转染效率高。在多种细胞中能够高效介导质粒DNA的转染和外源基因的表达。

2.   细胞毒性低。Omifection对大多数细胞系和原代细胞没有毒性,转染后可以不更换细胞培养液。

3.   操作方便。本产品不受抗生素和血清的影响,转染前细胞不用换液。

五、使用说明

6孔细胞培养板培养的贴壁细胞作为实验体系,细胞转染实验步骤如下:

1.    细胞培养。胰酶消化法收集细胞,计数后接种到6孔板中,24 h后细胞密度达到50%-80%

2.    转染复合体制备。移取200 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco)加入灭菌的EP管(1.5 mL)中,再依次加入2 μg质粒(质粒体积依据质粒浓度计算)和6 μL Omifection转染试剂,混合10-20次,室温静置15-30 min 30 min转染效果会更好),形成转染复合体。

3.    细胞转染。将转染复合体加入细胞培养液中,轻摇混匀,转入CO2培养箱中继续培养。

4.    转染12-24 h后换液,48 h检测外源蛋白表达情况(如荧光显微镜下检测GFP荧光)。

1. DNAOmifectionOPTI-MEM用量表

培养板

DNA (μg)

Omifection 用量 (μL)

OPTI-MEM用量 (μL)

24   孔板

0.5

1.5

100

6   孔板

2

6

200

Φ   35 mm培养皿

2

6

200

Φ   60 mm培养皿

4

12

400

T25细胞培养瓶

5

15

500


六、常见问题与分析

问题

可能原因

解决方案

转染效率低

细胞株本身转染效率较低。

提高质粒和Omifection的用量。

细胞没有处于对数生长期。

细胞传代后24-36 h内转染。

细胞密度过高与过低。

调整细胞接种数量,转染时后细胞密度达到50-80%

质粒纯度和浓度偏低。

请使用去除蛋白污染的质粒,OD260/2801.7-1.9之间,浓度为0.2 μg/μl以上。

质粒用量较少。

请参考说明书中的质粒DNA用量,每孔细胞转染的质粒DNA用量不可少于最低用量。

目的基因未完全表达。

转染24 h后外源基因开始表达,48 h后达到高峰,选取转染后48 h检测目的基因表达,效果较好。

转染复合体形成时间偏短。

质粒DNAOmifection剧烈混合后,室温静置30 min,保证转染复合体充分形成,且加入细胞培养液前禁止再混匀,以免破坏转染复合体。

质粒DNAOmifection未按规定比例混合。

请按照质粒DNAOmifection =1μg3 μl的比例混合, Omifection的用量减少,则转染效率降低。

细胞毒性大

特定细胞株对Omifection敏感。

减少Omifection用量,转染后6 h换液。

细胞密度偏低。

增加接种细胞密度,转染是细胞密度达到50%以上。

质粒纯度较低。

使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒,增加质粒纯度。

细胞状态较差。

提高细胞状态,或更换细胞。

Omifection用量较大。

请按表格规定用量使用Omifection

 



 


版权归属:omiget@2021

备案号: 京ICP备19057070号-2